eBlot L1快速濕轉(zhuǎn)儀是用來轉(zhuǎn)印蛋白的儀器,電泳轉(zhuǎn)印為轉(zhuǎn)移蛋白常用的方法,該技術(shù)有效、迅速,并且使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。在凝膠中向印跡膜載體轉(zhuǎn)印分離的蛋白質(zhì)的過程,即是電泳轉(zhuǎn)印法。
因?yàn)榇思夹g(shù)往膜上轉(zhuǎn)印蛋白GX、快速和準(zhǔn)確,并且能夠使得蛋白在凝膠中保持高分辨率,在轉(zhuǎn)移印跡技術(shù)中得到廣泛的應(yīng)用。
eBlot L1快速濕轉(zhuǎn)儀準(zhǔn)備工作:
1、準(zhǔn)備對緩沖液進(jìn)行轉(zhuǎn)移,緩沖液的pH值.不要無故調(diào)整,如果儀器過熱出錯,那么可能選擇了不適合的緩沖液。
2、通電以后,凝膠在轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡,平衡能夠?qū)㈦娪揪彌_液中的鹽和清潔劑從凝膠中除去。若不將鹽去除,將對緩沖液產(chǎn)生很大的影響,并且使得儀器在轉(zhuǎn)移過程中過熱。
除此以外,在緩沖液中,低濃度的凝膠(<12%的聚丙烯酰胺)會縮水,平衡調(diào)整凝膠為電泳轉(zhuǎn)移提供便利。凝膠的濃度決定了平衡所需時間。
3、以凝膠為依據(jù)將適宜大小的膜剪裁出來,在緩沖液中通過45度夾角緩慢滑入膜,并且浸泡15-30分鐘,從而濕潤*,不然的話,那么會容易起對轉(zhuǎn)移起到阻滯作用的氣泡。應(yīng)當(dāng)使用鑷子或者帶手套來避免污染膜。
4、以凝膠為依據(jù)將適宜大小的膜剪裁出來,2張加厚型濾紙或4張厚濾紙或6張薄濾紙被需要,將濾紙?jiān)谵D(zhuǎn)移緩沖液中浸透*。
5、若一次轉(zhuǎn)膜多張,使用透析膜隔開,也應(yīng)當(dāng)*浸透透析膜。
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